Correction de l'auteur: Un système CRISPR / Cas permet l'évasion et la virulence innées par le virus bactérien

Nous n'avons pas été en mesure de reproduire l'expérience de stabilité de l'ARN de la figure 2a de la présente lettre et nous n'observons plus de diminution, dépendante de Cas9, des niveaux relatifs de l'ARN. FTN_1103 transcription. Les nouvelles données révèlent que le type sauvage et cas9 mutant par délétion (Δcas9) les souches ont des niveaux équivalents de FTN_1103 ARNm à chaque instant (voir Fig. 1 de cet amendement). Nous n’avons pas d’explication sur la divergence avec les données originales, mais cela peut être dû en partie aux complications découlant de la mesure de la stabilité de la FTN_1103 transcrit dans des souches avec des niveaux de base très différents de cet ARNm. Nous n’avons pas non plus été en mesure de reproduire les résultats des expériences d’immunoprécipitation présentées à la Fig. 2g de la Lettre originale et nous n’observons plus de niveaux inférieurs du FTN_1103 transcription après immunoprécipitation avec Cas9 (R59A) –Flag par rapport à Cas9 – Flag de type sauvage (voir Fig. 2 de cet amendement). Nous observons toujours la tendance initiale de niveaux plus élevés de petits ARN (ARNc) associés à CRISPR-Cas et transARN recombinant (tracrRNA) dans l'immunoprécipitation de type sauvage Cas9 – Flag par rapport au mutant Cas9 (R59A) –Flag (Fig. 2e, f de la lettre d'origine). Cependant, nous ne pouvons pas exclure que ces nouveaux résultats reflètent simplement les niveaux globaux de ces transcrits dans les différentes souches, en raison de l’absence biologique d’un contrôle réglementé par Cas9 en dehors de la zone de contrôle. FTN_1103 lieu. Indépendamment de l'expérience d'immunoprécipitation, il existe encore des données génétiques robustes indiquant que l'ARNARN et le tracrARN sont nécessaires pour la répression de Cas9 dépendante de FTN_1103 niveaux d'ARNm.

De plus, sur la figure 2h de cette lettre, un mutant de tracrRNA (tracrRNA (rc13-17)) contenant des substitutions dans le site d'interaction putatif avec FTN_1103 a été utilisé pour suggérer que l'expression de FTN_1103 a été réprimé via une interaction avec le tracrARN. Bien que non connues à l’époque, les données cristallographiques ultérieures¹ indique que la mutation en tracrARN était dans une région importante de la tige-boucle qui interagit avec Cas9, et que Cas9 s'est avéré nécessaire pour la stabilité des taux de tracrARN². Pour ces raisons, on ne peut plus déduire définitivement le rôle des bases de tracrARN mutées dans la répression de FTN_1103 et n'ont aucune preuve pour soutenir un rôle de tracrARN en interaction directe avec FTN_1103 ARN

Ensemble, ces résultats suggèrent que nous ne disposons pas de preuves pour soutenir la dégradation de l'ARN en tant que mécanisme qui sous-tend la régulation de Cas9 par médiation FTN_1103 expression de l'ARNm. Les autres expériences et conclusions présentées dans la lettre ne sont pas affectées par cet amendement, et nous nous excusons pour les précédentes données trompeuses et pour l’effet qu’elles ont pu avoir sur d’autres personnes sur le terrain. Nous remercions Hannah K. Ratner d’avoir identifié ces erreurs, d’avoir mené les expériences décrites ici avec Siddharth Jaggavarapu et d’avoir rédigé la majorité de cet amendement. La lettre originale n'a pas été corrigée.

1.Deltcheva, E. et al. Maturation de l'ARN CRISPR par le petit ARN trans-codé et le facteur hôte RNase III. La nature 471, 602–607 (2011).

2. Hirano, H. et al. Structure et ingénierie de Francisella novicida Cas9. Cellule 164950–961 (2016).